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簡述6種抗菌藥對雞大腸桿菌病的療效比較
摘 要：本次試驗對從甘肅農業大學提供的雞大腸桿菌菌種進行了體外抑菌試驗，觀察了硫酸多黏菌素、鹽酸土霉素、硫酸新霉素、乳酸諾氟沙星、硫酸慶大霉素、頭孢拉啶對大腸桿菌的抑制效果。體外抑菌試驗采用的是藥敏試驗的紙片擴散法，藥敏試驗結果顯示硫酸多黏菌素和鹽酸土霉素屬于極度敏感，硫酸新霉素和乳酸諾氟沙星屬于高度敏感，硫酸慶大霉素和頭孢拉啶屬于中度敏感。選取某養殖戶健康雞350羽，分為7組(其中一組為對照組)，分別用這6種藥物進行治療，6種藥物中硫酸多黏菌素的療效最好，治愈率達98 %，其他四種藥物也有較好的療效。通過本次試驗為靖遠地區雞大腸桿菌病的防治用藥提供參考。
關鍵詞：大腸桿菌;藥敏試驗;抗菌藥物;療效
隨著我國養禽業集約化的快速發展，禽類疾病也越來越頻發。細菌性疾病呈現上升趨勢[1-2]，大腸桿菌病已成為困擾養禽業主要的疾病之一。禽大腸桿菌病是由大腸桿菌的某些致病性菌株所引起的多種禽病的總稱，其特征是引起雞的心包炎、腹膜炎、關節炎、輸卵管炎、大腸桿菌性腸炎、肉芽腫、敗血癥等癥狀[3]。例如雞胚感染大腸桿菌后可導致雞胚的死亡率升高、孵化率下降以及增加雛雞發病死亡率。成年雞感染大腸桿菌可增加死亡率，導致生長緩慢、飼料酬勞率降低。由于禽大腸桿菌抗原性比較復雜、臨床病變表現復雜，所以當禽大腸桿菌病常與病毒性疾病和其他細菌性疾病并發或繼發時，容易給養禽業帶來十分大的危害。目前禽大腸桿菌病臨床上一般已藥物治療為主[4-5]。但是，由于養殖過程中用藥不科學、盲目的濫用抗菌類藥物，使得細菌的耐藥性理由逐漸的顯現出來，由此造成的危害十分嚴重，不僅降低了抗菌藥的療效、延長治療周期，而且增加了死亡率，給養禽業帶來了巨大的經濟損失。
1 試驗材料
1.1 主要儀器與設備
托盤天平、電熱恒溫干燥箱、隔水式恒溫培養箱、打孔器、無菌操作臺、微量移液槍、試管、燒杯、錐形燒瓶、平皿、接種環、定性濾紙、打孔器。
1.2 試劑
瓊脂、牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、0.1 mol/L氫氧化鈉溶液、純化水、滅菌生理鹽水。
1.3 藥品
硫酸多黏菌素可溶性粉，批號20140301，規格：100 g/袋。由上海宏牧動物藥業有限公司生產。鹽酸土霉素可溶性粉，批號140702，規格：100 g/袋;由華北制藥集團動物保健有限公司生產。硫酸新霉素可溶性粉，批號：140201，規格：100 g/袋;由華北制藥集團動物保健有限公司生產。乳酸諾氟沙星可溶性粉，批號20140816，規格：100 g/袋;由北京華盛堂生物科技有限公司生產。硫酸慶大霉素可溶性粉，批號140102，規格：100 g/袋;由華北制藥集團動物保健有限公司生產。頭孢拉啶可溶性粉，批號20140906，規格：100 g/袋;由北京華盛堂生物科技有限公司生產。
1.4 試驗動物
由靖遠某雞場提供33日齡健康三黃雞350羽(均未使用過任何藥物)，雌雄各半，體重相近，試驗前觀察一周，正常采食和飲水。
1.5 試驗菌種
由甘肅農業大學動物醫學院實驗室提供。
2 試驗策略
2.1 培養基的制備
根據《獸醫微生物學實驗指導》[6]，制備營養肉湯、伊紅美藍培養基，置于4 ℃冰箱保存備用。
2.1.1 菌種活化
將實驗室提供的大腸桿菌接種于3 mL～5 mL經滅菌的試管肉湯中，置于37 ℃恒溫箱，培養16 h～18 h。用滅菌接種環取出少量接種于伊紅美藍培養基，劃線均勻，以獲得單個菌落。
2.1.2 挑取單一菌落培養
用滅菌接種環在伊紅美藍培養基中挑取單一菌落接種于3 mL～5 mL經滅菌的試管肉湯中，置于37 ℃恒溫箱，培養16 h～18 h。
2.2 藥敏片的制備
2.2.1 藥液的配制
因藥物的濃度和劑量直接影響抑菌試驗的結果，所以藥品需精確配制。商品藥應嚴格按照其推薦治療量配制。
2.2.2 藥敏片的制備
參照《抗菌藥物的藥敏試驗策略》中藥敏紙片的制作策略[7]，將定性濾紙，用打孔機打成6 mm直徑的圓形小紙片，每100片一組，并將其放入6個清潔干燥的無菌瓶中，用牛皮紙包扎瓶口。經121 ℃高壓滅菌15 min后，放在37 ℃恒溫箱中過夜，使完全干燥。按每張紙片飽和吸水量為0.01 mL計算，向小瓶內分別加入不同6種藥液1 mL，不停翻動紙片，使紙片在藥液中充分浸泡1 h，置于4 ℃冰箱內1 h～2 h。在分別放置在平皿中，烘箱烘干，4 ℃冰箱保存備用。
2.3 藥敏試驗
在超凈臺中，將稀釋的菌液，置于瓊脂平板表面，用已滅菌玻璃棒涂布均勻。在超凈臺中干燥5 min后，用無菌鑷子將上述6種藥敏試紙貼于瓊脂平板表面，每種紙片貼3張，并輕壓使其緊貼在平板表面，藥敏試紙一旦接觸平板就不要再輕易移動。各紙片中心距離應大于26 mm，需準確記錄每種藥敏片的名稱，置于37 ℃溫箱培養16 h～18 h，取出觀察結果。
2.4 臨床試驗分組及用藥
將養雞場提供的350羽雞隨機分為7個組試驗，每組50羽，雌雄各半，體重相近。用藥組每羽試驗雞均口服大腸桿菌菌液0.6 mL，進行人工誘導感染。試驗分組及用藥情況見表1。
3 結果與分析
3.1 藥敏試驗
如表2所示，根據抑菌圈直徑的大小，6種藥物對大腸桿菌的敏感性依次為硫酸多黏菌素、鹽酸土霉素、硫酸新霉素、乳酸諾氟沙星、硫酸慶大霉素、頭孢拉啶。根據美國NCCLS判定標準，硫酸多黏菌素和鹽酸土霉素屬于極度敏感，硫酸新霉素和乳酸諾氟沙星屬于高度敏感，硫酸慶大霉素和頭孢拉啶屬于中度敏感。
3.2 臨床治療試驗
6種抗菌藥對雞大腸桿菌病的治療效果見表3。由表3可知，對350羽病雞分別采用硫酸多黏菌素、鹽酸土霉素、硫酸新霉素、乳酸諾氟沙星、硫酸慶大霉素、頭孢拉啶進行治療，硫酸多黏菌素平均治愈率最高為98 %，其后依次為硫酸新霉素、乳酸諾氟沙星、硫酸慶大霉素和頭孢拉啶。
4 討論
4.1 自制藥敏片的好處
本次試驗采用的是靖遠地區臨床常用藥物制成的藥敏片。通過試驗證明，應用自制的藥敏紙片進行藥敏試驗，能做到靈活選藥，與某病菌相關的藥物均可隨時制作成藥敏紙片，可在當地范圍內從常用的藥品中篩選出最敏感的藥物，并且可在短時間內確定最優藥物和最佳劑量，既能及時治療降低死亡率，又能避開盲目用藥，減少浪費。
4.2 應用抗菌藥必須有明確的臨床指征
在選用抗菌藥物對雞大腸桿菌病進行治療時，必須要有明確的臨床指征作為依據。現階段我國的雞大腸桿菌病多以混合感染為主，但不同病原為主的混合感染表現的臨床癥狀也不盡相同，在臨床應用中應根據臨床癥狀、病例剖檢[8]，再結合實驗室診斷結果進行綜合判定，找出病原，根據病原選擇最佳的藥物進行治療，切不能在不明病因的情形下盲目用藥。
4.3 盡量做到根據藥敏試驗結果選藥
雞大腸桿菌主要通過呼吸道感染，并且容易產生耐藥性。因此，在選用抗生素類藥物治療大腸桿菌病時必須具有針對性。如果條件允許，最好要對分離的病菌進行藥敏試驗，根據藥敏試驗結果針對性地選擇藥物，這樣會起到藥半功倍的效果[9-11]。
5 結論
本次試驗將靖遠地區的大腸桿菌，人工誘導健康雞感染發病，通過臨床療效和實驗室藥敏試驗，確定此次所選藥品中的硫酸多黏菌素對治療雞大腸桿菌病的治療效果顯著，適用于靖遠地區雞大腸桿菌病的治療。
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