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藥用石斛多糖的含有量測評(píng)探究論文
石斛傳統(tǒng)的入藥部位是莖，但從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：根和葉的含量比較高，建議全草入藥。由于藥材采集樣品不全的原因，沒有對(duì)每一種均進(jìn)行根、莖、葉多糖含量的測定。
藥用石斛多糖的含有量測評(píng)探究論文
【摘要】目的測定不同種石斛及金釵石斛、馬鞭石斛、疊鞘石斛、鼓槌石斛的不同藥用部位中多糖的含量。
方法采用紫外-可見分光光度法。
結(jié)果不同種石斛莖中多糖含量為：球花石斛18.96%，馬鞭石斛24.89%，金釵石斛20.49%，報(bào)春石斛15.83%，腫節(jié)石斛8.27%，
疊鞘石斛16.32%，鼓槌石斛15.33%，美花石斛28.28%，兜唇石斛9.26%;4種石斛不同藥用部位多糖的含量：金釵石斛根15.36%，莖20.49%，葉22.30%;馬鞭石斛根17.56%，莖24.89%，葉20.88%;疊鞘石斛根9.48%，莖16.32%，葉17.42%;鼓槌石斛根10.06%，莖15.33%，葉19.81%。
結(jié)論該實(shí)驗(yàn)方法簡便、快速、準(zhǔn)確。
各種石斛及其根莖葉中多糖含量均比較高，從資源的綜合和可持續(xù)利用的角度考慮，建議可以全草入藥;美花石斛、球花石斛、報(bào)春石斛、疊鞘石斛、鼓槌石斛、腫節(jié)石斛莖在進(jìn)行藥效研究的提前下，確認(rèn)是否可以替代當(dāng)前《中國藥典》品種入藥。
【關(guān)鍵詞】石斛多糖紫外-可見分光光度法
石斛屬Dendrobium為蘭科最大的屬之一，全世界共有一千五百多種，廣泛分布于亞洲、歐洲及大洋洲等熱帶及亞熱帶地區(qū)。
我國約有76種，主要分布于西南、華東及華南地區(qū)。
石斛首先記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，并列為上品。
《本草綱目》言：“俗方最以補(bǔ)虛，主治傷中，除痹下氣，補(bǔ)五臟虛勞羸瘦，強(qiáng)陰益精;厚腸胃，補(bǔ)內(nèi)絕不足，逐皮膚邪熱癢氣，治男子腰腳軟弱，健陽，補(bǔ)腎益力，壯筋骨，暖水臟，輕身延年等”在我國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中經(jīng)歷了2000年以上的應(yīng)用歷史。
《中國藥典》2005年版收載金釵石斛DendrobiumnobileLindl、鐵皮石斛DendrobiumcandidumWall.ex.Lindl、馬鞭石斛DendrobiumfimbriatumHook。
石斛具有滋陰清熱、益胃生津和潤肺止咳等功效，常用于治療熱病傷津、口干煩渴、病后虛熱等多種病癥。
現(xiàn)代藥理研究證明石斛中多糖類成分是石斛具有免疫增強(qiáng)作用和抗腫瘤作用的活性成分。
石斛為我國常用貴重藥材，野生資源匱乏，而種植石斛規(guī)模較小，不能滿足臨床和新藥開發(fā)的需要;而且民間藥用石斛品種較復(fù)雜且規(guī)格不統(tǒng)一，它們能否替代藥典品種入藥，是迫切需要解決的問題。
因此，本文對(duì)9種石斛莖中多糖、4種石斛的不同部位中多糖含量進(jìn)行了測定，以期能尋找到石斛新的藥用資源和新的藥用部位，為科學(xué)、合理和正確使用該類藥材提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
一、材料與儀器
1.1儀器UV一752分光光度計(jì)(上海第三分析儀器廠);SHB-3循環(huán)多用真空泵(鄭州杜甫儀器廠);hh-2數(shù)顯恒溫水浴鍋(國華電器有限公司);hctp11b5托盤天平(北京醫(yī)用天平廠);
正德牌遠(yuǎn)紅外可控調(diào)溫電爐(成都市聚焱電器廠);DHG-9240A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;KQ-250B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。
1.2藥材石斛藥材收集于云南各地、四川夾江縣歇馬鄉(xiāng)及成都五塊石藥材市場，所有藥材均經(jīng)劉圓教授鑒定。
二、方法與結(jié)果
2.1多糖的提取與精制稱取各石斛藥材粉末(過2號(hào)篩)100g，精密稱定，分別至圓底燒瓶中，各加入石油醚(60～90℃)400ml，脫脂30min，過濾，通風(fēng)櫥中揮去溶劑。
濾渣以80%乙醇100ml回流提取30min，趁熱過濾。
濾渣用80%熱乙醇充分洗滌，再于通風(fēng)櫥中揮去溶劑。
取各殘?jiān)謩e再用500ml蒸餾水回流2h，提取3次，趁熱過濾，用熱水洗滌藥渣和燒瓶，合并濾液。
濾液濃縮至150ml，加入等容積的sevag試劑(按正丁醇∶氯仿=4∶1配制而成)，分液漏斗萃取。
取上層液體，反復(fù)操作。
紫外分光光度計(jì)掃描，無蛋白吸收峰。
逐滴加入乙醇(95%)至整個(gè)溶液中含醇量達(dá)到80%，滴加過程中用磁力攪拌器攪拌，靜置過夜。
抽濾，沉淀用無水乙醇反復(fù)洗滌，60℃真空干燥，得各石斛精制多糖，封裝備用。
2.2對(duì)照品溶液的制備稱取葡萄糖約0.08g于小燒杯中，精密稱定，用蒸餾水溶解后，移至100ml棕色容量瓶中，用蒸餾水定容，搖勻，得對(duì)照品溶液。
2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液1，1.5，2，2.5，3，3.5ml，分別置50ml棕色容量瓶中，各加蒸餾水至刻度。
精密量取上述各濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5ml于10ml棕色容量瓶中，各精密加入5%苯酚溶液1.0ml，搖勻，迅速加入5.0ml濃硫酸，在沸水浴中加熱20min，冷卻至室溫。
在波長490nm下測定吸光度，同時(shí)做一空白，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
對(duì)所測數(shù)據(jù)采用回歸法計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為Y=4.9949X-0.0252(r=0.9994)，結(jié)果表明在0.016～0.294mg/ml之間，葡萄糖濃度與吸光度值具有良好的線性關(guān)系。
2.4穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液0.5ml，置10ml容量瓶中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自“加入5%苯酚溶液1ml”起，依法每隔0.5h測定吸光度值，連續(xù)4h，結(jié)果吸光度基本無變化，樣品溶液的穩(wěn)定性良好。
2.5精密度實(shí)驗(yàn)精密量取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5ml，置10ml容量瓶中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自“加入5%苯酚溶液1ml”起，依法重復(fù)測定吸光度，RSD為1.06%(n=6)。
結(jié)果表明精密度良好。
2.6加樣回收率實(shí)驗(yàn)分別取相應(yīng)石斛粉末各0.25g，分別精密加人葡萄糖儲(chǔ)備液適量，按樣品制備和含量測定方法測定，平均回收率98.62%，RSD為1.27%(n=9)，符合測定要求。
2.7換算因子的實(shí)驗(yàn)稱取6O℃干燥至恒重的相應(yīng)石斛多糖各10mg，精密稱定。
分別配制成0.1mg/ml溶液。
各取0.5ml按標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備方法，測定吸收度，另取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液，同法操作，求出相應(yīng)石斛中葡萄糖濃度，按下列公式計(jì)算換算因素11種石斛多糖換算因子。
f=多糖重量/(多糖液的葡萄糖濃度×多糖的稀釋因素)
2.8不同種、不同藥用部位多糖的含量測定精密稱取60℃恒重的上述石斛莖粉末(過2號(hào)篩)各0.5g，精密稱定，分別置圓底燒瓶中，加入石油醚(60～90℃)5.0ml，脫脂30min，過濾，通風(fēng)櫥中揮去溶劑。
濾渣以80%乙醇100ml回流提取30min，趁熱過濾。
濾渣用80%熱乙醇充分洗滌，再于通風(fēng)櫥中揮去溶劑。
取殘?jiān)儆?00ml蒸餾水回流2h，提取3次，趁熱過濾，用熱水洗滌藥渣和燒瓶，合并濾液，冷卻后在500ml量瓶中蒸餾水定容。
精取各石斛提取液0.5ml，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下操作，測定吸收度，按下列公式計(jì)算樣品中的多糖含量，重復(fù)6次，取平均值。
結(jié)果見表2，3。
表2不同種石斛莖中多糖的含量(略)表34種石斛不同部位的多糖含量(略)
多糖含量(%)=C×D×f×V/w
C：樣品溶液中葡萄糖濃度(μg/ml);D：樣品溶液的稀釋因素;f：換算因素;V：樣品溶液體積(ml);W：樣品溶液的重量(μg)
三、討論
在所測的樣品中，球花石斛中多糖含量和藥典中所收載石斛品種含量接近，美花石斛中多糖的含量高于金釵石斛和馬鞭石斛，因此從免疫增強(qiáng)作用和抗腫瘤作用的有效成分石斛多糖的角度考慮，在進(jìn)行藥效研究的前提下，確認(rèn)美花石斛、球花石斛、報(bào)春石斛、疊鞘石斛、鼓槌石斛、腫節(jié)石斛莖是否可以替代當(dāng)前藥典品種入藥。
石斛傳統(tǒng)的入藥部位是莖，但從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：根和葉的含量比較高，建議全草入藥。
由于藥材采集樣品不全的原因，沒有對(duì)每一種均進(jìn)行根、莖、葉多糖含量的測定，實(shí)驗(yàn)正在進(jìn)行之中。
雖然不同種中石斛莖的多糖含量均較高，但還是有較大差異，提示各藥材的品質(zhì)有差異。
又由于實(shí)驗(yàn)所采集樣品多數(shù)為野生隨機(jī)采樣，不能準(zhǔn)確地確定藥材的生長年限，生態(tài)環(huán)境也不完全相同，故可考慮規(guī)范化種植后再用本方法對(duì)上述石斛進(jìn)行平行比較研究，并得出更為準(zhǔn)確、可靠的結(jié)論。
【參考文獻(xiàn)】
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