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醫學檢驗畢業論文

大鼠肝動脈插管并體外留置模型的改進論文

時間:2022-10-09 02:50:37 醫學檢驗畢業論文 我要投稿
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大鼠肝動脈插管并體外留置模型的改進論文

  目的 對體外留置肝靶向性給藥途徑的大鼠動脈插管模型進行改進,并探討建立此模型的技術要點。方法 在10倍手術顯微鏡下,采用特制內徑0.5 mm導管(由硬膜外麻醉導管加工而成)經胃十二指腸動脈剪口處插入肝動脈血管內,逆行到達肝固有動脈開口處后留置導管并固定。結果 20只大鼠造模,成功者17只,成功率為85%。結論 改進型大鼠肝動脈插管并體外留置模型較以往造模方法簡單,并提高了模型成功率,技術易于推廣,可應用于抗肝腫瘤、肝衰竭等靶向性給藥的研究。
  
  〔Abstract〕 Objective To improve the model of hepatic artery(HA) catheter and detain the catheter in vitro in rats, and approach the skill keys and value of establishing the model. Method Under the operation microscope(10×), a self-made catheter with 0.5mm ID, developed by peridural anesthetic catheter, was intubated into hepatic artery, through gastroduodenal artery, then the catheter was retained and fixed in rats. Result 20 rats were used to establish the model, in which 17 rats model were successful, the ratio was 85%. Conclusion The improved model is much easily established and achievement ratio is higher than others, which may be used to study on targeting administration in curing liver tumor or hepatic failure.
  
  〔Key words〕 Model; rats; HA catheterization; detaining in vitro; improvement
  
  肝固有動脈插管的動物模型建立早有報道,但原有的方法易造成肝臟損傷、死亡率高,技術難以掌握。在實驗研究中我們改進造模方法,掌握了技術要點,取得較為滿意的效果,現將實驗方法報道如下。
  
  1 材料與方法
  
  1.1  材料
  
  1.1.1  動物  健康SD大鼠20只,清潔級,體質量(300±50)g,雌雄各半。由湖南農業大學動物實驗中心提供,合格證號sck(湘)2003-0003。
  
  1.1.2  手術器械  止血鉗4把,有齒鑷、持針器各1把,12.5 cm顯微鑷1把,14 cm顯微剪1把,系線鑷2把,小動脈夾數枚,縫合針數枚,0號、4號縫合絲線各數支,自制內徑0.5 mm動脈插管數根(由硬膜外麻醉導管加工而成)。
  
  1.1.3  儀器  Z20P5 10倍手術顯微鏡:蘇州六六視覺科技股份有限公司;ES-1100型電子天平:長沙湘平科技發展有限公司。
  
  1.1.4  藥品  戊巴比妥鈉:國藥集團化學試劑有限公司,批號:F20041117,25 g/瓶,肝素鈉注射液:江蘇萬幫生化醫藥股份有限公司,12 500 u/(mL·支),青霉素鈉注射液:山西太行藥業股份有限公司,80萬u/支。
  
  1.2  方法
  
  擬參考Lindell肝動脈插管法[1]及賴力英等人的方法[2]進行改進,具體步驟如下。
  
  1.2.1  術前準備  術前1天停止喂食,自由飲水;將硬膜外麻醉導管置于60 ℃恒溫水浴箱中,預熱拉長為內徑約0.5 mm的導管,插口處剪成鍥形,管內插入0.5 mm動脈介入導管的金屬導絲;于手術前30 min經大鼠尾靜脈注射50 u/mL肝素鈉溶液2 mL進行手術前血液肝素鈉化;以2%戊巴比妥鈉45 mg/kg腹腔注射麻醉。
  
  1.2.2  造模方法  劍突以下的腹部剃毛后,絡合碘消毒皮膚,手術按常規無菌手術規程操作。在腹部正中用手術刀切開皮膚切口2.5~3.0 cm,用無齒鑷提起腹肌沿腹白線剪開腹肌,用止血鉗鉗夾切口兩側的腹肌,暴露肝臟;于胃與肝交界處用棉簽鈍性分離肝臟乳頭葉,在其下方肝門區找到肝門靜脈、肝固有動脈和膽管三者并行的Glisson系統,以最底下管徑較粗的肝門靜脈定位,中間外徑較圓且有搏動的管道為肝固有動脈,下行分出胃十二指腸動脈及胃右動脈,右行為肝總動脈。去除血管外壁的結締與脂肪組織,將各血管分離; 胃十二指腸動脈與胃右動脈交界處用0號絲線結扎血管,近心端用絲線套起備用,小動脈夾夾閉肝總動脈,在血管己經結扎處前方剪開血管壁約1/3~1/2(見圖1),剪口前短暫松小動脈1次使胃右動脈血管充盈;將特制導管經胃、十二指腸動脈剪口入動脈血管,逆行到達肝固有動脈開口處,將導管內金屬導絲退出,確認管腔通暢后,近心端用已經套起的絲線結扎并固定,松開動脈夾; 從腹壁引出導管并固定,連續縫合腹壁肌層。皮膚切口以75%乙醇消毒后用絲線縫合,引出的導管潛行于皮下至頸背部引出,用50 u/mL肝素鈉生理鹽水溶液封管,導管末端在乙醇燈下燒灼封口;術后大鼠臀部肌肉注射青霉素鈉20 000 u/100 g,1次/3~5 d,防感染;隔天用生理鹽水通管,并用50 u/mL肝素鈉生理鹽水溶液封管;每只大鼠單籠飼養。
  
  2 結果
  
  術中2只大鼠由于胃、十二指腸動脈剪口處血管斷裂無法插管;術后20 h 1只因傷口滲血、便血而死亡;其余17只全部存活,成功率達85%,且術中出血量少,肝葉沒有出現明顯的損傷。術后0.5~1 h完全清醒,術后8 h可以行走,12 h飲食、活動逐漸恢復正常,傷口4 d完全愈合。術后留置管能順利導入藥物入肝,并能長期維持此功能(見圖2)。
  
  3 討論

  
  3.1  大鼠肝動脈插管并體外留置模型研制的目的與意義
  
  目前在以肝臟為靶臟器的藥效研究仍不理想,除了藥物本身的藥理作用原因外,肝靶向性差可能是重要的原因之一[3]。藥物必須在其作用部位達到足夠的濃度方能產生其特征性效應[4]。藥物經周圍靜脈進入血液循環后,經過藥代動力學的改變,到達肝臟的濃度已相當低,從而影響了臨床療效。而大劑量藥物使用又可能造成對其他臟器的嚴重毒副作用,或醫療成本的提高。經由導管置入肝固有動脈的開口,藥物可以不經體循環,順血流直接作用于肝臟,肝靶向性強。這項技術能有效的提高藥效、減低用藥劑量、降低治療成本以及減少藥物的毒副作用。如,肝癌血供的90%以上來自肝動脈,經肝動脈給藥可有效提高腫瘤局部的藥物濃度,從而提高藥效,減少抗肝腫瘤藥物對其它臟器的毒副作用。所以肝動脈插管并體外留置大鼠模型在抗肝腫瘤、肝衰竭等研究藥物對肝臟作用是有重要意義。
  
  3.2  大鼠肝動脈插管并體外留置模型研制的現狀
  
  在藥物對肝臟靶臟器作用的研究中,Lindell肝動脈插管法常用于一次性的給藥實驗,在打開動物腹腔導入藥后又重新關閉,不能多次性的重復給藥。而在科研實驗中,往往需要多次乃至長期給藥,這就需要肝動脈導管長期體外留置備用,而目前這方面的模型建立報道較少。參照現有的相關文獻進行模型構建,發現有不少不足之處:①肝固有動脈和胃、十二指腸動脈難以定位,尋找時,極容易造成肝包膜下瘀血及肝葉損傷;②導管插入成功后,回流的血液極易在狹窄的管道內凝固而阻塞管道;③手術意外、動物死亡常見,失敗率高。
  
  3.3  大鼠肝動脈插管并體外留置模型的改進及體會
  
  在成功建立大鼠肝動脈插管并體外留置模型之后,總結經驗認為此技術改進的關鍵有以下幾點。
  
  ①大鼠的選擇  鼠齡太小或體質量太輕,其胃、十二指腸動脈管徑相應會過小而致導管無法插入;鼠齡太大,血管與脂肪組織粘連過多難以分離,且血管老化失去彈性極易斷裂;選擇鼠齡在16~30周,體質量在250~350 g的大鼠,實驗效果比較理想;②手術前血液肝素鈉化可以避免在導管插入成功后,回流的血液凝固阻塞管道,同時也可以起到充盈靶血管的作用,但要注意避免肝素用量過大而致傷口滲血、不愈合;③麻醉劑及量的選擇  在參閱文獻及預實驗效果比較后最終選擇了戊巴比妥鈉,它具有起效快、可控性強、副作用小等優點[5];鑒于實驗大鼠個體差異性,以2%戊巴比妥鈉45 mg/kg標準,先推總量的2/3,以全身軟癱、角膜反射消失為進行麻醉完成的基準,若不足余下的以0.1 mL/次試推直至完成;④血管分離  Glisson系統中肝門靜脈、肝固有動脈和膽管三者被共同的血管周圍纖維囊所包裹,故術中血管分離操作須十分小心,盡量祛除血管外壁的結締與脂肪組織將各血管分離,以便于血管結扎、剪切口;因為大鼠肝葉較脆,血運豐富,所以動作要輕柔,盡量避免機械損傷;動脈夾夾閉肝總動脈時間不宜過長,盡量將肝臟缺血再灌注損傷降低至最低程度;⑤導管留置  導管插入后松開動脈夾,可見管內血液回流,為導管插入成功的標志;導管潛行于皮下是其長期留置體外的關鍵,由于大鼠活潑好動,喜歡撕咬,一般手術置管后導管容易被撕裂、咬斷,故注意嚴防感染,加強局布消毒,并防止凝血堵管,定期使用肝素鈉通管。

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