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大鼠肝動脈插管并體外留置模型的改進(jìn)論文

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大鼠肝動脈插管并體外留置模型的改進(jìn)論文

  目的 對體外留置肝靶向性給藥途徑的大鼠動脈插管模型進(jìn)行改進(jìn),并探討建立此模型的技術(shù)要點。方法 在10倍手術(shù)顯微鏡下,采用特制內(nèi)徑0.5 mm導(dǎo)管(由硬膜外麻醉導(dǎo)管加工而成)經(jīng)胃十二指腸動脈剪口處插入肝動脈血管內(nèi),逆行到達(dá)肝固有動脈開口處后留置導(dǎo)管并固定。結(jié)果 20只大鼠造模,成功者17只,成功率為85%。結(jié)論 改進(jìn)型大鼠肝動脈插管并體外留置模型較以往造模方法簡單,并提高了模型成功率,技術(shù)易于推廣,可應(yīng)用于抗肝腫瘤、肝衰竭等靶向性給藥的研究。
  
  〔Abstract〕 Objective To improve the model of hepatic artery(HA) catheter and detain the catheter in vitro in rats, and approach the skill keys and value of establishing the model. Method Under the operation microscope(10×), a self-made catheter with 0.5mm ID, developed by peridural anesthetic catheter, was intubated into hepatic artery, through gastroduodenal artery, then the catheter was retained and fixed in rats. Result 20 rats were used to establish the model, in which 17 rats model were successful, the ratio was 85%. Conclusion The improved model is much easily established and achievement ratio is higher than others, which may be used to study on targeting administration in curing liver tumor or hepatic failure.
  
  〔Key words〕 Model; rats; HA catheterization; detaining in vitro; improvement
  
  肝固有動脈插管的動物模型建立早有報道,但原有的方法易造成肝臟損傷、死亡率高,技術(shù)難以掌握。在實驗研究中我們改進(jìn)造模方法,掌握了技術(shù)要點,取得較為滿意的效果,現(xiàn)將實驗方法報道如下。
  
  1 材料與方法
  
  1.1  材料
  
  1.1.1  動物  健康SD大鼠20只,清潔級,體質(zhì)量(300±50)g,雌雄各半。由湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物實驗中心提供,合格證號sck(湘)2003-0003。
  
  1.1.2  手術(shù)器械  止血鉗4把,有齒鑷、持針器各1把,12.5 cm顯微鑷1把,14 cm顯微剪1把,系線鑷2把,小動脈夾數(shù)枚,縫合針數(shù)枚,0號、4號縫合絲線各數(shù)支,自制內(nèi)徑0.5 mm動脈插管數(shù)根(由硬膜外麻醉導(dǎo)管加工而成)。
  
  1.1.3  儀器  Z20P5 10倍手術(shù)顯微鏡:蘇州六六視覺科技股份有限公司;ES-1100型電子天平:長沙湘平科技發(fā)展有限公司。
  
  1.1.4  藥品  戊巴比妥鈉:國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司,批號:F20041117,25 g/瓶,肝素鈉注射液:江蘇萬幫生化醫(yī)藥股份有限公司,12 500 u/(mL·支),青霉素鈉注射液:山西太行藥業(yè)股份有限公司,80萬u/支。
  
  1.2  方法
  
  擬參考Lindell肝動脈插管法[1]及賴力英等人的方法[2]進(jìn)行改進(jìn),具體步驟如下。
  
  1.2.1  術(shù)前準(zhǔn)備  術(shù)前1天停止喂食,自由飲水;將硬膜外麻醉導(dǎo)管置于60 ℃恒溫水浴箱中,預(yù)熱拉長為內(nèi)徑約0.5 mm的導(dǎo)管,插口處剪成鍥形,管內(nèi)插入0.5 mm動脈介入導(dǎo)管的金屬導(dǎo)絲;于手術(shù)前30 min經(jīng)大鼠尾靜脈注射50 u/mL肝素鈉溶液2 mL進(jìn)行手術(shù)前血液肝素鈉化;以2%戊巴比妥鈉45 mg/kg腹腔注射麻醉。
  
  1.2.2  造模方法  劍突以下的腹部剃毛后,絡(luò)合碘消毒皮膚,手術(shù)按常規(guī)無菌手術(shù)規(guī)程操作。在腹部正中用手術(shù)刀切開皮膚切口2.5~3.0 cm,用無齒鑷提起腹肌沿腹白線剪開腹肌,用止血鉗鉗夾切口兩側(cè)的腹肌,暴露肝臟;于胃與肝交界處用棉簽鈍性分離肝臟乳頭葉,在其下方肝門區(qū)找到肝門靜脈、肝固有動脈和膽管三者并行的Glisson系統(tǒng),以最底下管徑較粗的肝門靜脈定位,中間外徑較圓且有搏動的管道為肝固有動脈,下行分出胃十二指腸動脈及胃右動脈,右行為肝總動脈。去除血管外壁的結(jié)締與脂肪組織,將各血管分離; 胃十二指腸動脈與胃右動脈交界處用0號絲線結(jié)扎血管,近心端用絲線套起備用,小動脈夾夾閉肝總動脈,在血管己經(jīng)結(jié)扎處前方剪開血管壁約1/3~1/2(見圖1),剪口前短暫松小動脈1次使胃右動脈血管充盈;將特制導(dǎo)管經(jīng)胃、十二指腸動脈剪口入動脈血管,逆行到達(dá)肝固有動脈開口處,將導(dǎo)管內(nèi)金屬導(dǎo)絲退出,確認(rèn)管腔通暢后,近心端用已經(jīng)套起的絲線結(jié)扎并固定,松開動脈夾; 從腹壁引出導(dǎo)管并固定,連續(xù)縫合腹壁肌層。皮膚切口以75%乙醇消毒后用絲線縫合,引出的導(dǎo)管潛行于皮下至頸背部引出,用50 u/mL肝素鈉生理鹽水溶液封管,導(dǎo)管末端在乙醇燈下燒灼封口;術(shù)后大鼠臀部肌肉注射青霉素鈉20 000 u/100 g,1次/3~5 d,防感染;隔天用生理鹽水通管,并用50 u/mL肝素鈉生理鹽水溶液封管;每只大鼠單籠飼養(yǎng)。
  
  2 結(jié)果
  
  術(shù)中2只大鼠由于胃、十二指腸動脈剪口處血管斷裂無法插管;術(shù)后20 h 1只因傷口滲血、便血而死亡;其余17只全部存活,成功率達(dá)85%,且術(shù)中出血量少,肝葉沒有出現(xiàn)明顯的損傷。術(shù)后0.5~1 h完全清醒,術(shù)后8 h可以行走,12 h飲食、活動逐漸恢復(fù)正常,傷口4 d完全愈合。術(shù)后留置管能順利導(dǎo)入藥物入肝,并能長期維持此功能(見圖2)。
  
  3 討論

  
  3.1  大鼠肝動脈插管并體外留置模型研制的目的與意義
  
  目前在以肝臟為靶臟器的藥效研究仍不理想,除了藥物本身的藥理作用原因外,肝靶向性差可能是重要的原因之一[3]。藥物必須在其作用部位達(dá)到足夠的濃度方能產(chǎn)生其特征性效應(yīng)[4]。藥物經(jīng)周圍靜脈進(jìn)入血液循環(huán)后,經(jīng)過藥代動力學(xué)的改變,到達(dá)肝臟的濃度已相當(dāng)?shù)停瑥亩绊懥伺R床療效。而大劑量藥物使用又可能造成對其他臟器的嚴(yán)重毒副作用,或醫(yī)療成本的提高。經(jīng)由導(dǎo)管置入肝固有動脈的開口,藥物可以不經(jīng)體循環(huán),順血流直接作用于肝臟,肝靶向性強(qiáng)。這項技術(shù)能有效的提高藥效、減低用藥劑量、降低治療成本以及減少藥物的毒副作用。如,肝癌血供的90%以上來自肝動脈,經(jīng)肝動脈給藥可有效提高腫瘤局部的藥物濃度,從而提高藥效,減少抗肝腫瘤藥物對其它臟器的毒副作用。所以肝動脈插管并體外留置大鼠模型在抗肝腫瘤、肝衰竭等研究藥物對肝臟作用是有重要意義。
  
  3.2  大鼠肝動脈插管并體外留置模型研制的現(xiàn)狀
  
  在藥物對肝臟靶臟器作用的研究中,Lindell肝動脈插管法常用于一次性的給藥實驗,在打開動物腹腔導(dǎo)入藥后又重新關(guān)閉,不能多次性的重復(fù)給藥。而在科研實驗中,往往需要多次乃至長期給藥,這就需要肝動脈導(dǎo)管長期體外留置備用,而目前這方面的模型建立報道較少。參照現(xiàn)有的相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行模型構(gòu)建,發(fā)現(xiàn)有不少不足之處:①肝固有動脈和胃、十二指腸動脈難以定位,尋找時,極容易造成肝包膜下瘀血及肝葉損傷;②導(dǎo)管插入成功后,回流的血液極易在狹窄的管道內(nèi)凝固而阻塞管道;③手術(shù)意外、動物死亡常見,失敗率高。
  
  3.3  大鼠肝動脈插管并體外留置模型的改進(jìn)及體會
  
  在成功建立大鼠肝動脈插管并體外留置模型之后,總結(jié)經(jīng)驗認(rèn)為此技術(shù)改進(jìn)的關(guān)鍵有以下幾點。
  
  ①大鼠的選擇  鼠齡太小或體質(zhì)量太輕,其胃、十二指腸動脈管徑相應(yīng)會過小而致導(dǎo)管無法插入;鼠齡太大,血管與脂肪組織粘連過多難以分離,且血管老化失去彈性極易斷裂;選擇鼠齡在16~30周,體質(zhì)量在250~350 g的大鼠,實驗效果比較理想;②手術(shù)前血液肝素鈉化可以避免在導(dǎo)管插入成功后,回流的血液凝固阻塞管道,同時也可以起到充盈靶血管的作用,但要注意避免肝素用量過大而致傷口滲血、不愈合;③麻醉劑及量的選擇  在參閱文獻(xiàn)及預(yù)實驗效果比較后最終選擇了戊巴比妥鈉,它具有起效快、可控性強(qiáng)、副作用小等優(yōu)點[5];鑒于實驗大鼠個體差異性,以2%戊巴比妥鈉45 mg/kg標(biāo)準(zhǔn),先推總量的2/3,以全身軟癱、角膜反射消失為進(jìn)行麻醉完成的基準(zhǔn),若不足余下的以0.1 mL/次試推直至完成;④血管分離  Glisson系統(tǒng)中肝門靜脈、肝固有動脈和膽管三者被共同的血管周圍纖維囊所包裹,故術(shù)中血管分離操作須十分小心,盡量祛除血管外壁的結(jié)締與脂肪組織將各血管分離,以便于血管結(jié)扎、剪切口;因為大鼠肝葉較脆,血運豐富,所以動作要輕柔,盡量避免機(jī)械損傷;動脈夾夾閉肝總動脈時間不宜過長,盡量將肝臟缺血再灌注損傷降低至最低程度;⑤導(dǎo)管留置  導(dǎo)管插入后松開動脈夾,可見管內(nèi)血液回流,為導(dǎo)管插入成功的標(biāo)志;導(dǎo)管潛行于皮下是其長期留置體外的關(guān)鍵,由于大鼠活潑好動,喜歡撕咬,一般手術(shù)置管后導(dǎo)管容易被撕裂、咬斷,故注意嚴(yán)防感染,加強(qiáng)局布消毒,并防止凝血堵管,定期使用肝素鈉通管。

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