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羥苯磺酸鈣膠囊不同含量測定方法的比較
畢業論文無論對普通大學畢業生還是成教畢業生都是個撓頭的問題，開題報告、參考文獻等等都是讓人十分煩惱的事情，下面YJBYS小編為大家帶來自考醫學專業論文，歡迎閱讀!
【摘要】 目的 建立UV吸收系數法和HPLC法測定羥苯磺酸鈣膠囊的含量，并與文獻方法進行比較。方法①UV吸收系數法:溶劑為水，測定波長為301 nm，吸收系數Ε1%1 cm為188(以C12H10CaO10S2計);②UV對照品法:溶劑為水，測定波長為301 nm;③鈰量滴定法;④HPLC法:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，0.2%磷酸二氫鉀?甲醇(體積比90∶10)為流動相;檢測波長為301 nm。 結果 UV吸收系數法、UV對照品法和鈰量滴定法3種方法的結果基本一致，HPLC法測定結果較其他3種方法的低。結論 HPLC法的可以有效分離可能存在的降解產物，比其他3種方法更能有效反映產品的真實質量，有利于產品的質量控制。
【關鍵詞】 羥苯磺酸鈣膠囊;高效液相色譜法;紫外吸收系數法
2,5?羥苯磺酸鈣(羥苯磺酸鈣)，是一種微循環血管改善劑，能選擇性作用于毛細血管壁，調節和改善毛細血管的滲透性和脆性，主要用于各種原因引起的毛細血管疾病，是目前唯一防治糖尿病視網膜病變的有效藥物。
目前，對本品的含量測定文獻報道的有UV對照品法[1，2]和鈰量滴定法[3]，本文建立UV吸收系數法和HPLC法用于本品的含量測定，并與文獻方法進行比較分析，現將結果報道如下。
1 儀器與試藥
日本島津UV?2450紫外分光光度計，Waters2996 Series高效液相色譜儀,Mettler100型電子天平。羥苯磺酸鈣對照品(質量分數：95.0%，批號：100573-200401，由中國藥品生物制品檢定所提供)，羥苯磺酸鈣膠囊(批號：0705301、0705302、0705303，規格：500 mg，由國內某藥廠提供)，對苯二酚(廣州化學試劑廠)，甲醇為色譜純，磷酸二氫鉀為分析純。
2 UV吸收系數法
2.1 測定方法
取本品20粒內容物，精密稱定，研細，混合均勻，精密稱取適量(約相當于羥苯磺酸鈣100 mg)，置100 mL量瓶中，加水適量振搖使溶解，并加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液5 mL，置200 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，照紫外?可見分光光度法(中國藥典2005年版二部附錄Ⅳ A)，在301 nm的波長處測定吸光度;按C12H10CaO10S2的吸收系數為188[4]計算即得。
2.2 專屬性考察
2.2.1 溶劑的選擇 根據文獻和試驗，本品在水中極易溶解，故選用水為溶劑。
2.2.2 專屬性與測定波長的選擇 取羥苯磺酸鈣對照品適量，加水溶解并稀釋制成每1 mL中約含羥苯磺酸鈣25 μg的溶液，照紫外-可見分光光度法，在250～350 nm的波長范圍內掃描。另取空白輔料和膠囊殼，同法配置成空白輔料的水溶液，在200～350 nm的波長范圍內掃描。圖譜見圖1。結果表明，羥苯磺酸鈣在301 nm波長處有最大吸收;空白輔料和膠囊殼的水溶液在301 nm處無干擾吸收，不影響本品的測定。
2.3 線性試驗
取供試品內容物適量，精密稱定，用水制成每1 mL中含羥苯磺酸鈣0.25 mg的溶液，分別精密量取1.0、3.0、5.0、7.0及10.0 mL，各置50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，分別制成每1 mL中含羥苯磺酸鈣5、15、25、35及50 μg的供試品溶液，分別于301 nm波長處測定吸光度，以吸光度(A)對質量濃度(ρ)作線性回歸，得回歸方程：ρ=0.1236A+0.0229，r=0.999 7，n=5，表明羥苯磺酸鈣的質量濃度在5～50 μg/mL范圍內與吸光度線性關系良好。
2.4 回收率試驗
取本品中各空白輔料，按處方比例配制，分別按標示量的80%、100%、120%加入羥苯磺酸鈣對照品，加水適量配制成每1 mL中含羥苯磺酸鈣20、25、30 μg的溶液各3份，在301 nm的波長處測定吸光度，計算，測得平均回收率為99.99%(RSD為0.12%，n=9)。
2.5 重復性試驗
取同一批號(0705301)樣品6份，按“2.1”項方法測定含量，結果分別為100.8%、101.2%、100.6%、101.3%、100.7%和100.9%，平均含量為100.9%，RSD為0.3%(n=6)。
2.6 穩定性試驗
取供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10 h測定吸光度，吸光度基本不變，RSD為0.3%。
3 HPLC法
3.1 色譜條件
采用Kromasil C18柱(5 μm，4.6 mm×250 mm)，以0.2%磷酸二氫鉀?甲醇(體積比90∶10)為流動相，檢測波長為301 nm。該色譜條件下，羥苯磺酸鈣的理論板數為4800，保留時間約為10 min，對苯二酚的保留時間約為14 min。見圖2。
3.2 專屬性考察
3.2.1 酸降解產物的檢測 取本品適量，加1 mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋制成約2 mg/mL的溶液，放置15 h，加1 mol/L氫氧化鈉溶液中和后，進樣，記錄色譜圖，見圖3。
HPLC chromatogram of sample in acid solution
3.2.2 堿降解產物的檢測 取本品適量，加1 mol/L氫氧化鈉溶液溶解并稀釋制成約2 mg/mL的溶液，放置15 h，加1 mol/L鹽酸溶液中和后，進樣，記錄色譜圖，見圖4。
3.2.3 氧化產物的檢測 取本品適量，加3%過氧化氫溶液溶解并稀釋制成約1 mg/mL的溶液，放置4 h，進樣，記錄色譜圖，見圖5。
3.2.4 光降解產物的檢測
取本品適量，加水溶解并稀釋制成約1 mg/mL的溶液，置4 500 LX光照下照射24 h，進樣，記錄色譜圖，見圖6。
取本品適量，置4 500 LX光照下照射10 d，加水溶解并稀釋制成約1 mg/mL的溶液，進樣，記錄色譜圖，見圖7。檢測結果顯示，各條件下的降解物質在該色譜條件下均能達到較好的分離。
3.3 線性試驗
取供試品內容物適量，精密稱定，用水制成每1 mL中含羥苯磺酸鈣0.202 3 mg的溶液，分別精密量取1、5、10、20、35、50及100 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積(A)對進樣量(m)作線性回歸，得線性回歸方程
m=1.4648×10-6A-0.03717，r=0.999 9(n=7)。
3.4 回收率試驗
取本品中各空白輔料，按處方比例配制，分別按標示量的80%、100%、120%加入羥苯磺酸鈣對照品，加水適量配制成每1 mL中含羥苯磺酸鈣0.16、0.2、0.24 mg的溶液各3份，按“3.9”項方法測定，平均回收率為99.67%,RSD為0.41%(n=9)。
3.5 精密度試驗
精密量取供試品溶液20 μL，注入液相色譜儀，重復進樣6次，測得羥苯磺酸鈣峰面積的RSD為0.23%。
3.6 重復性試驗
取同一批號(0705301)樣品6份，按“3.9”項方法測定含量，結果分別為100.9%、100.8%、100.8%、100.9%、100.3%和100.3%，平均含量為100.7%，RSD為0.3%(n=6)。
3.7 穩定性試驗
取供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10 h進樣測定，羥苯磺酸鈣的峰面積基本不變，RSD%為0.32%。
3.8 方法耐用性考察
取3條不同品牌的色譜柱，分別測定，各系統適用性參數見表1。結果表明 ，本方法耐用性良好。表1 方法耐用性考察結果
3.9 含量測定方法
取本品20粒內容物，精密稱定，混合均勻，精密稱取適量(約相當于羥苯磺酸鈣250 mg)，置100 mL量瓶中，加水適量，振搖使溶解后加水稀釋至刻度，濾過，精密量取續濾液2 mL，置25 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。精密量取20 μL，注入色譜儀，記錄色譜圖;另取羥苯磺酸鈣對照品20 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，同法測定。按外標法以峰面積計算，即得。
4 4種含量測定方法的比較
分別采用以上建立的UV吸收系數法、HPLC法和文獻報道的UV對照品法[1]及鈰量滴定法[2]對3批樣品進行含量測定，測定結果見表2。表2 4種含量測定方法的結果比較 標示量
5 討 論
5.1 羥苯磺酸鈣的分子結構中含有2個酚羥基，決定了其光不穩定性和易氧化等化學性質[4]。為此，本文建立了專屬性較高的高效液相色譜法，該方法可有效分離羥苯磺酸鈣在合成過程中引入的雜質對苯二酚以及在儲存過程中產生的其他降解產物。
5.2 從表2的結果分析，鈰量滴定法、UV對照品法和UV吸收系數法3種方法的結果基本一致，而HPLC法的結果較前3種方法低約0.3%～1.7%，表明HPLC法對可能存在的降解產物有較好的專屬性和分離效果，較其他3種方法更能有效反映產品的真實質量，有利于產品的質量控制和政府監管部門的稽查監督工作。
5.3 國家標準收載的鈰量滴定法，需要使用劇毒物質三氧化二砷標化滴定液，不利于實驗室的管理和環境的保護，建議控制使用或盡量避免使用該方法。
5.4 5.5 從HPLC的專屬性考察，本品在水溶液中對光的敏感度比固體粉末更強，提示在實驗過程中除避免陽光直射外，溶液配制后不宜放置太長時間。
【參考文獻】
[1] 中國藥品生物制品檢定所.進口藥品復核標準匯編[M].2002.
[2] BP:2008[S].2008：351.
[3] 國家藥典委員會.國家藥品標準新藥轉正標準:34冊[S].34-49.
[4] 王緋，陳英.羥苯磺酸鈣有關物質方法的建立[J].廣東藥學院學報，2006，22(3)：279-280.
[5] 陳英.羥苯磺酸鈣吸收系數的測定和應用[J].今日藥學,2008,18(4)：32.
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