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物理學畢業論文

探究復乳法制備雪蓮納米粒

時間:2023-03-31 22:51:32 物理學畢業論文 我要投稿
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探究復乳法制備雪蓮納米粒

  本文利用包含雪蓮有效成分的雪蓮注射液中間體為原料藥,將傳統的注射液改為復乳型納米溶液,為制成順應性更高的劑型提供技術支持。希望可以幫助大家。

  摘要: 目的利用雪蓮注射液中間體為原料,制備雪蓮納米粒,以提高患者對雪蓮用藥的順應性和達到緩釋作用。方法以復乳法制備雪蓮納米粒,雪蓮原料藥溶解于乙二醇中作為內水相,聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)溶解在二氯甲烷-丙酮(2∶1)的混和溶劑中作為油相,加入乳化劑形成W/O型初乳后以蒸餾水作為外水相在乳化劑作用下形成W/O/W型復乳納米溶液。結果納米粒的平均粒徑在134 nm;Zeta電位為-8.06;包封率為42.83%,載藥量為2.17%;12 h體外釋放39.57%。結論復乳法能夠得到性質穩定和具有緩釋功能的雪蓮納米粒。

  關鍵詞: 雪蓮; PLGA 納米粒; 復乳法; 緩釋

  雪蓮注射液的主要成分包括黃酮、多糖和生物堿類。其中黃酮類成分是雪蓮抗炎止痛的主要成分,能夠促進腎上腺皮質激素的合成,不但能顯著提高小鼠免疫功能,對抗風濕性關節炎[1],還具有抗癌、解痙、降壓和平喘作用[2,3]。生物堿能夠收縮血管,改變血管通透性從而起到強心、抗炎抗風濕和鎮痛作用。多糖類成分則具有消除自由基、抗疲勞作用,并且能夠興奮子宮平滑肌,治療婦女小腹冷痛[1]。納米中藥作為中藥現代化的重要手段之一,為藥物在機體內的吸收和發揮作用提供了更為廣泛的選擇,賦予傳統中藥以新的功能,如緩釋、增強靶向性、豐富給藥途徑、提高生物利用度、降低毒副作用等[4]。

  1 、材料與儀器

  1.1 試劑雪蓮原料藥(雪蓮注射液的中間體,新疆民族藥中藥研究所提供);聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA,50/50,M=15000,山東岱罡生物公司);蘆丁標準品(中國藥品生物制品鑒定所);甲醇(上海凌峰化學試劑有限公司)為色譜純;氫氧化鈉、磷酸二氫鉀吐溫-80、司班-80(上海醫藥集團上海化學試劑公司)、二氯甲烷、丙酮、乙二醇、甲醇、乙腈等(國藥集團化學試劑有限公司)均為分析純。

  1.2 儀器BS124S 電子天平:賽多利斯科學儀器(北京)有限公司; SPD-20A 島津高效液相色譜儀:日本島津公司;布魯克海文激光粒徑儀Zeta PLUS-90:美國布魯克海文儀器公司;GG-17旋轉蒸發儀:上海大研儀器有限公司;TGL-16C高速臺式離心機:上海安亭科學儀器廠;電鏡:JEM-2010/INCA OXFORD, 日本。

  2 、方法[5,6]

  2.1 納米粒的制備稱取10 mg雪蓮注射液中間體超聲溶解于1 ml乙二醇中,為內水相,稱取33.9 mg PLGA加入燒杯中,加入2∶1的二氯甲烷-丙酮至重量為2.56 g,作為油相,加入司班-80 0.25 g,吐溫-80 0. 50 g,在油相中加入攪拌子,在磁力攪拌器上高速攪拌使油相和乳化劑混合均勻,然后用注射器抽取0.3 ml內水相緩緩滴加到油相中,3 000 r/min攪拌形成具有藍色乳光的W/O型初乳。稱取吐溫-80 0.65 g,加入80 ml蒸餾水中作為外水相,在乳化劑作用下將制得的W/O型初乳滴入其中,900 r/min攪拌制得W/O/W復乳型納米溶液。最后將制得的納米溶液在旋轉蒸發儀上旋蒸,去除有機溶劑。

  2.2 粒徑測量取適量雪蓮納米粒膠體分散體系加去離子水稀釋10倍,用激光散射粒度測定儀測定其粒徑平均大小。

  2.3 Zeta電位將稀釋10倍的納米溶液靜置1 h,用Zeta電位儀測定其電位,平行測定6次。

  2.4 透射電鏡實驗(TEM)在經透射電鏡掃描以前,對納米溶液應進行處理:配制2%的磷鎢酸溶液,將納米溶液滴加在銅網上后,待表面烘干,滴加1~2滴2%的磷鎢酸溶液進行染色,再在燈下將所制樣品徹底烘干后進樣觀察。

  2.5 載藥量、包封率的測定采用HPLC法對納米粒的載藥量和包封率進行測定。根據雪蓮的有效成分采用蘆丁(Rutin)作為標準品,以黃酮類成分的含量反映藥物的含量。使用迪馬C18反相色譜柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)在356 nm波長下以甲醇:0.1%磷酸水溶液5∶5為流動相[7];流速1ml/min。檢測得蘆丁的保留時間是4.86 min。取所制得的納米溶液1 ml,用0.1μm微孔濾膜濾去納米粒,濾液測定得游離藥物的量WF,1 ml納米溶液超聲破壞30 min,加4倍甲醇沉淀PLGA,10 000 r/min離心30 min, 進樣測定所得濃度×5為藥物總量WT。每毫升納米溶液凍干后質量為WN,每毫升納米溶液中藥物的投入量為WD。按下式計算包封率、載藥量。包封率(%)=(WT-WF)/ WT載藥量(%)= (WT-WF) /WN

  2.6 體外釋放實驗[8,9]本實驗根據2005版《中國藥典》配制磷酸鹽緩沖液PBS (pH=7.4)作為釋放介質,考察雪蓮納米粒的體外釋藥曲線。剪取10cm長的透析袋,用沸水煮5~10 min,再用蒸餾水沖洗干凈。取納米溶液6 ml, 加12 ml釋放介質,轉入透析袋中,檢查確保不漏液。將透析袋置于盛有70 ml釋放介質(PBS)燒杯中,加攪拌子 37℃恒溫50 r/min恒速磁力攪拌。在0,2 ,4 ,6 ,8 ,10 ,12 ,24 h后從透析袋外取溶液1.5 ml,同時補充相同體積的釋放介質。將取出的樣品進行HPLC檢測,計算其中藥物含量。配制相同藥物濃度的雪蓮原料藥的PBS溶液,按同樣方法測量釋放速率。

  3、 結果

  3.1 納米粒的制備和形態考察本實驗采用復乳法制備雪蓮納米粒,主要以粒徑及包封率為表征參數,考察乳化劑和油相的用量對納米粒形成的影響。

  3.1.1 納米粒的處方優化處方優化以能形成穩定、大小適度的納米粒和較高的藥物包封率為前提,主要從乳化劑的種類和用量、水油相之比等納米粒形成的關鍵步驟來篩選優化處方。見表1~3。表1 內水相乳化劑的用量對納米粒成型的影響 表2 二氯甲烷-丙酮的體積比對鈉米粒成型及包封率的影響· 表3 油相(二氯甲烷-丙酮)的量對納米粒成型的影響。

  3.1.2 粒徑測定粒徑,測定結果見圖1。納米粒平均粒徑為134.6 nm。圖1 處方優化后制備成納米粒的粒徑分布

  3.1.3 Zeta電位用Zeta電位儀測定其電位,測得平均Zeta電位為-8.06。說明納米溶液較穩定。

  3.1.4 透射電鏡實驗(TEM)用透射電鏡觀察到納米粒的形態。見圖2。圖2 優化后處方制備納米粒的電鏡圖 由電鏡照片看出納米粒形態為類球形,表面較光滑,大小均勻,納米粒之間基本無黏連。

  3.2 載藥量、包封率和藥物利用率包封率(%)=WT-WF/WT=42.83%載藥量(%)=(WT-WF)/WN= 2.17%

  3.3 體外釋放實驗原料藥和納米粒的體外釋放實驗結果如圖3所示:圖3 雪蓮原料藥和雪蓮納米粒體外釋放曲線由HPLC測定,計算納米粒溶液和雪蓮原料藥的體外累積釋放率得知,雪蓮原料藥體外釋放在2 h 達到82.14%,釋放速度很快。而在相同條件下,納米粒溶液在2 h時釋放為2.08%,12 h后達39.57%,釋放速度減緩,說明所制得納米粒能達到較好的緩釋效果。

  4 、討論

  根據PLGA和雪蓮原料藥的理化特性,選用復乳法制備聚合物納米粒是行之有效的方法。本實驗通過改變油相成分及用量、乳化劑用量從而制備得到理化性質較好的納米粒溶液。

  通過體外實驗的考察,雪蓮納米粒與雪蓮原料藥相比能達到緩釋作用,但體內是否能提高生物利用度,還有待于進一步考察。

  參考文獻:

  [1] 趙 莉,王曉玲. 新疆雪蓮的化學成分藥理作用及其臨床應用[J]. 西南民族大學學報(自然科學版),2003,29(4):424.

  [2] 陳玉珍,李鳳蘭. 藥用資源植物雪蓮化學成分及藥理作用[J]. 中國野生植物資源,2005,24(3):1.

  [3] 李君山,蔡少青. 雪蓮花類藥材的化學和藥理研究進展[J]. 中國藥學雜志,1998,33(8):449.

  [4] 劉麗芳,張陽德. 納米中藥研究與中藥現代化[J]. 中國現代醫學雜志,2009,19(8):1186.

  [5] 董 鑫. PLGA 載多柔比星磁性納米微球的制備與表征 [J]. 常熟理工學院學報(自然科學版),2008,22(10): 43.

  [6] Bergson F.OLIVEIRA, Ana E.R.FERREIRA, Silvia L.FIALHO & Armando SILVA-CUNHA.(2009) Lat.Am.J.Pharm.28:409.

  [7] 張 慧,趙 翔. HPLC法測定復方雪蓮膠囊中蘆丁的含量[J]. 光明中醫,2009,24(2):214.

  [8] 黃 義,李新中,雷 鵬,等. 黃芩苷固體脂質納米粒體外釋放研究[J]. 中國藥房,2009,20(9):646.

  [9] 符旭東,高永良.緩釋微球的釋放度試驗及體內外相關性研究進展[J]. 中國新藥雜志,2003,12(8):608.

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