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均勻設計法篩選蟾酥貼劑的透皮吸收促進劑論文
目的 篩選蟾酥貼劑的復合型透皮吸收促進劑。方法 以裸鼠皮膚為實驗屏障，應用均勻設計法從氮酮、丙二醇、油酸中選擇蟾酥貼劑的最佳吸收促進劑及其最佳配比。結果 氮酮、丙二醇、油酸的質量分數配比為6%∶10%∶0%時，蟾酥貼片中的蟾酥有最大的透皮速率常數。結論 氮酮丙二醇復合透皮吸收促進劑可促進蟾酥中蟾毒內酯類成分的透皮吸收。Abstract:Objective To optimize the skin penetration enhancers of arenobufagin patch.Methods Uniform design was used to optimize the 3 factors in the patch, namely azone, propylene glycol and oleic acid.Results and Conclusion The transdermal absorption reached a maximum when the ratio of azone, propylene glycol and oleic acid was 6%∶10%∶0%.
Key words:Arenobufagin; uniform design; azone; propylene glycol; oleic acid
蟾蜍為蟾蜍科動物中華大蟾蜍 Bufo bufo gargarizans Cantor 或黑眶蟾蜍 Bufo melanostictus Schneider 的干燥分泌物，具有解毒、止痛、開竅醒神的功效，臨床用于治療癰疽疔瘡、咽喉腫痛、中暑神昏、腹痛吐瀉等。由于毒性較大，常外用于治療腫瘤、肩周炎等，因而有必要進行其透皮給藥基礎研究。經皮給藥系統（transdermal drug delivery systems, 簡稱TDDs）或稱經皮治療系統（trandermal thrapeutic systerms 簡稱TTS）是藥物經由皮膚吸收進入人體血液循環并達到有效血藥濃度、實現疾病治療或預防的一類制劑。這類制劑在歐美國家習稱為貼劑（patch），在國內多定名為貼片。由于皮膚是限制藥物吸收程度和速度的屏障，在經皮給藥系統研究中，透皮吸收促進劑的選擇是關鍵。本文以Franz擴散池為實驗工具，用均勻設計法篩選了蟾酥貼劑的復合透皮吸收促進劑，旨在為蟾酥經皮給藥系統的研究提供實驗基礎。
1 實驗材料
蟾酥（購于南方醫科大學南方醫院中藥房，經南方醫科大學陳興興教授鑒定符合藥典標準）；脂蟾毒內酯對照品(中國藥品與生物制品檢定所)。聚丙烯酸酯壓敏膠、硅橡膠壓敏膠、聚異丁烯壓敏膠（藥用，廣州市化學工業研究所），PVA1788（藥用，廣州南方化玻公司）。
貝克曼紫外分光光度計（美國貝克曼公司）；滲透擴散裝置(中國藥科大學藥劑教研室提供)；SHZ?82型電熱恒溫水浴箱(江蘇太倉醫療器械廠)；多功能磁力攪拌器(安徽省天長恒運電器廠)。
雄性健康2周齡Balb/c裸鼠，由南方醫科大學實驗動物中心提供。
2 方法與結果
2.1 皮膚滲透液中蟾毒內酯分析方法的建立
2.1．1 標準曲線的制備［1］
精密稱取脂蟾毒內酯，加少量無水乙醇溶解后，定量轉移至100 mL容量瓶中，配制成質量濃度為0.206 mg/mL蟾毒內酯標準溶液。取上述蟾毒內酯標準液0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL各2份，一份置于10 mL容量瓶中，加乙醇?生理鹽水溶液（體積比50∶50）至刻度，另一份精密加入質量分數4％氫氧化鈉水溶液2 mL，用乙醇稀釋成刻度，搖勻，室溫放置40 min后于360 nm處測定水解前后的吸光度，計算吸光度差值ΔA，以ΔA對蟾毒內酯濃度進行回歸。
2.1．2 干擾試驗
按“2.2.3”項的透皮試驗方法，取12 h時間點的透皮接收液適量，在200～390 nm波長范圍內掃描，研究透皮接收液中的其他成分是否會干擾蟾毒內酯的含量測定。
2.2 透皮吸收試驗
2.2.1 皮膚的處理
裸鼠（18～20 g）處死后直接取腹部皮膚，仔細剝離皮下脂肪層，置于生理鹽水中于-40 ℃冷凍保存，實驗前自然解凍，于1周內進行實驗。
2.2.2 透皮吸收擴散裝置［2］
透皮吸收擴散裝置由上下兩只筒狀玻璃管對合而成，夾于玻璃管間的皮膚將其分成上下兩室。上室為擴散室，下室為接受室，在接受室的底部連有一個取樣管，供取樣、補充接收液和排除氣泡用，擴散室和接受室直徑1.6 cm，滲透面積為2.01 cm2，實驗中以潛水式多功能電磁攪拌器維持接受室動態環境，實驗維持32 ℃經皮滲透條件。
2.2.3 透皮吸收試驗方法
將所制備蟾酥貼片貼于預處理動物皮膚，注意結合緊密勿有氣泡，然后固定在滲透擴散裝置的擴散室與接受室之間，貼片的背襯層面向擴散室。在接受室中注入接收液17.0 mL，液面恰與皮膚內層接觸，開動電磁攪拌器和恒溫水浴，保持恒速攪拌（約200 r/min）和恒溫，在設定時間取樣5.0 mL置具塞試管中，每次取樣后均補加相同體積的新鮮接收液并排除接受室中的氣泡，樣液經微孔濾膜過濾后，于360 nm處測定吸光度，代入標準曲線求出相應的藥物濃度，按下式計算累積滲透量（Q）：
Q=Cn×17+∑n－1i=1Ci×5Aug
式中，Cn：第n個取樣點測得的藥物濃度（μg/mL），Ci：第i個取樣點測得的藥物濃度（μg/mL），A：滲透面積（cm2）。以累積滲透量Q對時間t1/2進行線性回歸所得方程即為Higuchi方程，所得斜率(K)即為透皮速率常數（J，μg·h·cm-2）。
2.3 蟾酥貼片的制備
精密稱取處方量蟾酥及處方量的PVA、促滲劑，置適量體積分數為70%的乙醇中，加熱回流使溶解，鋪膜、烘干，脫膜，用流延工藝涂布壓敏膠后，與背襯層和保護層復合即得成品。
2.4 透皮吸收促進劑的篩選
采用均勻設計［3］，以丙二醇（X2）、油酸鈉（X3）、氮酮（X1）3種促進劑的5種不同質量分數進行試驗，計算每次試驗的透皮速率常數，水平安排見表1。每次試驗的Higuchi方程和透皮速率常數見表2。表1 因素和水平（略）表2 Higuchi方程及透皮吸收速率常數（略）
用計算機將表中各因素的各水平對透皮速度率常數（J）進行回歸，得多元回歸方程為
Y=186.30＋2.68X1＋4.91X2－3.02X3
R=0.9943,F=29.46,S=4.40
根據回歸方程，計算優化條件為：
X1=6%，X2=10%，X3=0%
按優化條件，計算Y值，得Y=198.64。
對優化條件進行驗證，按優化條件制備3批PVA膜，按前法測定速率常數J，得平均速率常數為189.60 μg·h·cm-2。實驗結果與預測結果基本一致。
3 討 論
3．1 目前研究認為，透皮吸收促進劑的復合應用較單一應用對藥物的透皮吸收效果更佳。氮酮是第一個專門作為皮膚滲透促進劑而研制開發的化合物，用量少，對皮膚的毒性、刺激性都很低，是目前公認的一種優良的滲透促進劑，常與極性溶劑丙二醇（PG）并用，產生協同作用。油酸的促滲機制是滲入角質層細胞間脂質中，影響脂質雙分子層排列的密實性和流動性。丙二醇在透皮制劑中經常用作溶媒或載體，對藥物和其他促滲劑起到溶解和均勻混合作用。丙二醇單獨作為促滲劑時可能滲入角質層并在其中形成積蓄，由此增加藥物在角質層中的溶解性和分配性質。本研究結果表明，當氮酮-丙二醇的質量比為6∶10時，蟾酥貼片中蟾毒內酯類成分的滲透速率常數有最大值，提示丙二醇可能促進藥物滲入角質層從而促進氮酮的滲透作用。
3.2 均勻設計是近年來解決多因素多水平問題較好的方法，是對正交設計的簡化和發展，其實驗點在考察范圍內“均勻分散”，有效減少實驗次數，節約了時間和費用，同時又能獲得對實驗對象較全面深入的認識。本文通過均勻設計法篩選了蟾酥的透皮吸收促進劑，方案較正交設計簡單。本文結果為蟾酥經皮給藥系統的開發研究提供了初步理論基礎。
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